Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肝炎患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现呼吸道自身免疫到浮现1改进型哮喘临床腹泻的成效率在幼儿时期就有很好的详细描述，多个呼吸道自身免疫无症状的幼儿中都有70%在血清叠加后10周内患上哮喘，而随访15年的幼儿这一%-上升到84%。相对之下，占临床1改进型哮喘一半以上的改进型1改进型哮喘的病症机制还没得到更好的数据比对。

越来越多的人开始运用于分阶段该系统来定义1改进型哮喘的成效：个锥体在浮现多种呼吸道自身免疫时转回第1过渡期，浮现血糖异常时转回第2过渡期，浮现腹泻时转回第3过渡期。一些多发呼吸道自身免疫无症状的个锥体，在1期和2期，成效较速度快，并演进为病症的1改进型哮喘。我们早先详细描述了一两组在首次探测到多种呼吸道自身免疫样本后至不及10年无哮喘的极速度快成效者，这两组高血压伤亡人数不及，但外观上非常说明。随后，我们发现呼吸道自身抗原特异性CD8+T蛋白催化在成效缓速度快的高血压中都基本不共存，但在近期病症和长期共存的哮喘高血压中都很不易探测到。这或许暗示，与成效高血压相对，这些高血压自身免疫催化的可调增强。

早期数据比对暗示，尽管可调性T蛋白(Treg)数目情况下，但哮喘高血压共存一些功用缺陷，其中都包括对IL-2的催化能力减少。此外，哮喘高血压中都的畸变CD4+T蛋白或许对可调更具抵抗性，发挥为畸变T蛋白的正向减弱，共存产生的Treg和锥体外产生的正向Treg，以及抗原境遇的CD4+T蛋白中都IL-2催化减弱。本数据比对的旨在是详细描述了CD4+可调性T蛋白(Treg)在一小群极缓速度快成效者中都的外观上，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据比对是一项以一些人为基础的纵向数据比对，在21岁以下确诊的高血压亲属中都检查1改进型哮喘的小心因素。我们早先详细描述了长期缓速度快成效者的外观上，他们保持多重呼吸道自身免疫无症状超过10年，但没浮现哮喘的临床腹泻，速度快性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并愿意提供大量肝脏样本的缓速度快成效者纳入T和B蛋白功用比对。在目前的数据比对中都，8名速度快成效者(SP两组)，中都位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的呼吸道自身免疫无症状。所有的大多数人都正处于1改进型哮喘成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身免疫对某些抗原的无症状催化，然而，一名高血压已经正处于2期至不及6年，但没浮现临床腹泻，一名高血压被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中都对该供锥体开展了单独审计。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多给定流式蛋白练成和T蛋白正向试验车审计供锥体中都Treg的Hz、环境因素和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、总括和回归)开展无监督聚类比对，审计Treg环境因素。

结果：与健康供锥体相对，来自速度快成效锥体的清醒CD4+T蛋白的监督聚类结果显示，启动时的清醒CD4+ TregHz上升，与糖皮质激素正向的TNFR关的蛋白(GITR)理解上升有关。一名HbA1c上升的高血压与成效缓速度快者和匹配的印证两组相对，Treg小曲略有相同。功用比对暗示，与健康供锥体相对，来自缓速度快成效锥体的Treg抑制的CD4+畸变T蛋白正向明显受到影响。发挥为对畸变CD4+T蛋白CD25和CD134理解的正向上升。

所示1 深入的环境因素比对结果显示，CD4+Treg亚改进型在速度快成效队列中都上升。由FlowSOM生成的Treg室，围住在来自所有供锥体的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标识物理解鉴定出10个元簇:清醒T蛋白_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T蛋白;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个数据流亦然一个一个大(100个一个大)，较大的元一个大(10个元一个大)在数据流两组周围剪裁。每个数据流中都的饼所示声称单个标识的理解等级。(b)每个元聚类的热所示，以结果显示整锥体标识理解。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对重元素为每个metacluster罐终点站所示(重元素> 0.05%)确定为HD和SP两组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T蛋白(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T蛋白(l)。深蓝色圆圈亦然捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩化验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 运用于CITRUS的预测模改进型证实，TregHz的上升是成效缓速度快的图标。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP大多数人和匹配的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白上的关联性。(a)表改进型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的亦然性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解开展分离，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(白点)两组以及供锥体SP 606(深蓝色)中都CD25+ cd127的Hz汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的罐终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解低压着色，箭头引人注旨在簇被识别为SP和HD队列密切关系的相同。(j)罐终点站所示结果显示了在SP(白点)和HD(灰点)两组中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对重元素(%-)。(k)直方所示结果显示每个簇的环境因素(粉色)和Treg标识相对理解与背景理解(红色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中都标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩化验

所示3 与健康献血者相对，成效缓速度快者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T蛋白元簇(清醒T蛋白_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T蛋白;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个理解标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热所示(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR理解并联，结果显示直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对小写秩和化验，p< 0.07(深蓝色)所有供锥体包括，p< 0.05(红色)供锥体SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)并联，结果显示直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩化验

所示4 来自缓速度快成效的CD4+ treg蛋白控制畸变CD4+T蛋白的能力减少。SP两组用红色的终点站和圆圈声称，HD两组用黑色的终点站和圆圈声称，深蓝色的终点站/圆圈声称供锥体sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按通过观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠诱导蛋白，培养出来3几天后开展流式蛋白练成探测。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg培养出来(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养出来。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE正向多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的正向多于。运用于无症状印证(启动时的拥护蛋白不含treg)数值正向多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 畸变CD4+T蛋白对缓速度快成效的T蛋白诱导的正向更敏感。SP两组用红色的终点站和圆圈声称，HD两组用黑色的终点站和圆圈声称，深蓝色的终点站/圆圈声称供锥体sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按通过观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠诱导蛋白，培养出来3几天后开展流式蛋白练成(CD25反染)和蛋白因叔父比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培养出来。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE正向百分率(b)。(c,d) CD25正向百分率(c)和CD134正向百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中都的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们计算出来的论点是，来自缓速度快成效叔父的诱导清醒CD4+Treg在GITR理解中都得到了扩展和丰富，强调了大幅度数据比对Treg在1改进型哮喘效用个锥体中都的互补的必要性。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28